人半乳糖凝集素-3 ELISA 試劑盒
介紹
Galectin-3 是b-半乳糖苷結合凝集素家族的成員，該家族具有保守的碳水化合物識別域 (CDR)。它是一種位於細胞質、細胞核和細胞外空間的 35 kDa 蛋白質。它也是β-半乳糖苷結合蛋白家族的成員，在細胞間粘附、細胞基質相互作用、巨噬細胞活化、血管生成、細胞凋亡和胰島素抵抗中發揮重要作用。在 Behcet 病、甲狀腺、阿爾茨海默病、心血管疾病（如左心耳 (LAA) 中風）和幾種類型的癌症（尤其是轉移性癌症）中觀察到血清 galectin-3 水平升高。此外，肥胖患者的半乳糖凝集素 3 循環水平較高，它是胰島素抵抗的指標。
測定原理
該測定是定量夾心ELISA。免疫板預先塗有對人半乳糖凝集素 3 具有特異性的多克隆抗體。標準品和样品被移入孔中，任何存在的人半乳糖凝集素-3 都被固定化抗體結合。洗去任何未結合的物質後，將辣根過氧化物酶 (HRP) 連接的特異於人半乳糖凝集素-3 的多克隆抗體添加到孔中。在最後的洗滌步驟後，加入 HRP 底物溶液，顏色與最初結合的人半乳糖凝集素 3 的量成比例。停止測定並使用酶標儀測定孔的光密度。由於吸光度的增加與捕獲的人半乳糖凝集素 3 的量成正比，因此可以從每個測定中包含的參考曲線中插入未知樣品濃度。
檢測性能
一種。 標準曲線的典型代表
以下標準曲線僅供演示。應為每組樣品測定生成標準曲線。
人半乳糖凝集素-3 ( n g/mL)
吸光度
(450 納米)
消隱吸光度
0
0.082
0
0.625
0.111
0.029
1.25
0.15
0.068
2.5
0.213
0.131
5
0.404
0.357
10
0.782
0.70
20
1.542
1.46
40
2.663
2.581
B. 敏感性
該測定法可測量的最低水平的人半乳糖凝集素-3 為 0.145 n g/mL。
C. 特異性
重組蛋白的交叉反應
分析物
交叉反應
人類 FABP4
不
人類LCN2
不
人脂聯素
不
人類FGF - 21
不
D. 精度
測定內精密度（測定內的精密度）
在一塊板上測試了兩個已知濃度的樣品 8 次。
樣本
平均值 ( n g/mL)
標準差（n克/毫升）
簡歷 （％）
1
29.65
1.33
4.5
2
2.26
0.14
6.2
測定間精度（測定之間的精度）
兩個已知濃度的樣品在 8 個單獨的測定中進行了測試。
樣本
平均值 ( n g/mL)
標準差（n克/毫升）
簡歷 （％）
1
29.5
1.64
5.5
2
2.31
0.14
6.1
E. 斯派克
通過添加 90 µL 檢測血清樣品 樣品和 10 µL 加標儲備溶液的計算量以產生預期的 0、2.5、20 或 40 ng/mL 尖峰濃度
尖峰水平
預期的
（N微克/毫升）
觀察到的
（N微克/毫升）
恢復 （％）
低加標 (2.5 ng/mL)
2.23
2.02
90.3
培養基加標 (20 ng/mL)
23.1
17.3
74.9
高穗
(40 納克/毫升)
43.5
32.9
75.6
F. 線性
為了評估分析的線性，含有和/或摻入高濃度人半乳糖凝集素 3 的樣品用 1x 分析緩衝液連續稀釋，以產生具有分析動態範圍內值的樣品。
示例 1：
稀釋
測量值 ( n g/mL)
預期 ( n g/mL)
恢復 （％）
1/ 2
35.7
40
89.2
1/ 4
35.5
40
88.6
1/8
36.2
40
90.5