小鼠白細胞介素-33 (IL-33) ELISA 試劑盒
測定原理
該測定是定量夾心ELISA。微孔板預先塗有小鼠 IL-33 特異的多克隆抗體。標準品和样品被移入孔中，任何存在的小鼠 IL-33 都被固定化抗體結合。洗去任何未結合的物質後，將生物素標記的小鼠 IL-33 特異性多克隆抗體加入孔中。在去除任何未結合試劑的洗滌步驟後，加入鏈黴親和素-HRP 偶聯物 (STP-HRP)。在最後一個洗滌步驟後，加入 HRP 底物溶液，顏色與最初結合的小鼠 IL-33 的量成比例。停止測定並使用酶標儀測定孔的光密度。由於吸光度的增加與捕獲的小鼠 IL-33 的量成正比，因此可以從每個檢測中包含的參考曲線中插入未知樣品濃度。
檢測性能
一種。 標準曲線的典型代表
以下標準曲線僅供演示。應為每組樣品測定生成標準曲線。
小鼠 IL-33 (pg/mL)
吸光度
(450 納米)
消隱吸光度
0
0.11
0
31.25
0.145
0.027
62.5
0.179
0.062
125
0.236
0.118
250
0.319
0.202
500
0.65
0.532
1000
1.2
1.083
2000年
2.35
2.233
B. 敏感性
該測定法可檢測到的小鼠 IL-33 的最低水平為 6.5 pg/mL。
C. 精度
測定內精密度（測定內的精密度）
三個已知濃度的樣品在一塊板上測試 8 次。
樣本
平均值 (pg/mL)
SD (pg/mL)
簡歷 （％）
1
1387.6
56.4
4.1
2
700.1
20.7
6.5
3
56.4
3.0
5.7
測定內精密度（測定內的精密度）
三個已知濃度的樣品在不同的平板上測試 8 次。
樣本
平均值 (pg/mL)
SD (pg/mL)
簡歷 （％）
1
1425.7
33.5
2.4
2
713.8
29.6
4.2
3
146.3
18.3
12.5
D. 線性度
為了評估分析的線性，含有和/或摻入高濃度小鼠 IL-33 的樣品用 1x 分析緩衝液連續稀釋，以產生值在分析動態範圍內的樣品。
連續稀釋
測量 (pg/mL)
預期 (pg/mL)
恢復 ％
整潔的
1427.7
1427.7
100
1:2
703.7
713.9
98.6
1:4
329.7
356.9
92.4
1:8
171.2
178.5
95.9
F. 驗證
細胞培養上清液：
將小鼠的肺切成 1-2 毫米的碎片，並在 15 mL RPMI 中培養，該 RPMI 補充有 10% FBS、50 μM β-ME、100 U/mL 青黴素和 100 μg/mL 硫酸鏈黴素或用 1.0 μg/mL 脂多醣刺激(LPS) 24 小時。去除細胞培養基並測定小鼠IL-33的水平。此外，我們還收集了細胞裂解物並測量了 IL-33 水平，並與細胞裂解物中的總蛋白質水平進行了比較。
樣本
（細胞裂解物）
IL-33 水平/總蛋白
(皮克/毫克)
LPS 刺激
381.7
未受刺激
190.9
PUBLICATIONS CITING THIS PRODUCT
- Cheong LY, Wang B, Wang Q, Jin L, Kwok KHM, Wu X, Shu L, Lin H, Chung SK, Cheng KKY, Hoo RLC, Xu A. Fibroblastic reticular cells in lymph node potentiate white adipose tissue beiging through neuro-immune crosstalk in male mice. Nat Commun. 2023 Mar 3;14(1):1213.